感谢您使用本产品提取DNA,本产品依托成熟技术原理,独特试剂配方,采取创新方法整合提取步骤,将为您的科学研究提供极优的产品体验。本产品尤其适合微量样品(理论上100 个细胞的样品即可提取到足够量的DNA 供PCR 扩增,且能有效遗传分析扩增产物),本产品可快速提取全基因组DNA(核DNA或线粒体DNA),提取产物纯度高(DNA 纯度指示值A260/A280 比值约1.8),提取产物可用纯水溶解,对后续的PCR 扩增、检测等操作无影响。利用本产品提取DNA 其所需时间和仪器设备少,操作步骤简单,普通技术人员按照本产品说明书介绍的步骤操作,就能保证极高的提取成功率,不会浪费宝贵的检测样品和科研时间。此外,本产品对技术方法具有独创性、专利权,使用本试剂盒提取样本成本低廉;本产品主要成分均用分子级进口试剂配置,确保产品质量。试剂盒生产过程保证无菌环境,使用前无需消毒灭菌;产品所有试剂无任何挥发毒性,操作人员只要避免入口和皮肤直接接触,即不会对身体健康造成任何不利影响。相信本产品肯定会助力您的科学研究腾飞发展。
1.本说明书操作步骤中所有离心时间均为2分钟,转速均为9000RPM。
2.提取植物细胞样品需要预先破壁处理,如:液氮研磨。
3.人、动物等特殊组织(毛发,结缔组织、软骨、指甲等)提取时需要尽可能破碎(如:剪碎、切片、研磨匀浆等)以提高消化效率,提取精子细胞DNA需在第一步反应时添加适量1mol/l的二硫苏糖醇(DTT)2µl-5µl/(100µl“提取A液”),以彻底消化样品。
4.本产品有效期为1年,生产日期见外包装标签。
5.本产品中提取A、B、C、D液长期放置时需4℃保存,提取D液首次使用时请一次性添加无水乙醇35ml,且每次使用时均需-20℃充分预冷;提取C液使用前需充分震荡混匀。
6.本产品仅供科研使用。
第一步:取样品适量(建议取样在0.01g-0.2g范围内,也可以更低)加入本试剂盒中的“提取A液”60µl-150µl,实际体积根据样品量调整。如果提取样品量较大(大于0.2g)则应该相应增加提取A液的体积,原则是:提取A液完全浸没待提取样品。加完提取A液后涡旋震荡或用手指轻弹数次,再瞬时离心后放置到水浴锅中56℃保温30分钟,保温时间根据样品的性质自行调整(如:血液、唾液、培养细胞、细菌等30分钟保温即可,如果是肌肉组织、结缔组织、毛发等则需要延长保温时间至1-2个小时,以完全消化为准)。保温后可以99℃加热10分钟(用200µl体积试管提取样品时,建议使用PCR扩增仪加热)以彻底破裂样品细胞。注意:99℃加热不是必须步骤,请依据实验室硬件条件、样品特性自由选择。
第二步:保温结束后观察试管中样品是否彻底消化,如果肉眼仍见部分样品残留,可以补充少量提取A液继续56℃保温。如果第一步消化已经比较彻底,请加入“提取B液”,体积为第一步提取溶液的2.5倍-3倍(例如:提取培养肿瘤细胞若干(如果肿瘤细胞体积可以忽略不计),加入“提取A液”60µl,则第二步加入的“提取B液”体积应为150µl-180µl)。加好“提取B液”后,轻轻混匀。这时混合溶液中如果仍有肉眼可见杂质、样品载体(布片、棉絮、植物细胞壁残渣)等,请离心后再完全转移上清混合溶液。
第三步:在上述混合溶液中加入“提取C液”20µl,样品量大于0.2g时应适当增加“提取C液”的体积至30µl-40µl。轻轻混匀后静置10分钟。注意:“提取C液”使用前必须充分震荡混匀。
第四步:将上一步的提取溶液离心,保留沉淀。在沉淀中加入已经添加过无水乙醇且-20℃预冷的“提取D液”200µl-500µl漂洗第一次。加入“提取D液”后充分震荡试管,待沉淀散开后再次离心,保留沉淀。继续在沉淀中加入“提取D液”200µl-500µl按上述方法漂洗第二次。漂洗结束后,离心保留沉淀,注意:这时需要将“提取D液”彻底去除干净,可以采用移液器吸干或加热烘干的方法(烘干温度在60℃-90℃,肉眼看不到试管底部沉积“提取D液”即可,如果烘烤过于干燥反而不利于下一步DNA洗脱)。烘干后加入纯水(根据样品量、所需DNA产物浓度大致决定,建议30µl -100µl),用手轻弹或涡旋震荡试管并且56℃保温10分钟,充分洗脱DNA。洗脱结束后离心,保留上清DNA提取溶液备用,至此提取完成。